輸入您的關鍵字

全站搜索 大流行供應

如何用拭子檢測支原體

使用拭子檢測支原體通常涉及幾個步驟,包括樣本採集、DNA 萃取和分子測試。以下是過程的概要:

所需材料:

  • 無菌拭子
  • 運輸介質(例如,PBS 或特定支原體運輸介質)
  • DNA萃取試劑盒
  • PCR試劑及設備
  • 支原體檢測特異性引子
  • 凝膠電泳儀或即時螢光定量PCR儀

逐步程序:

1. 樣本採集:

  1. 準備工作:
  • 戴上無菌手套並使用無菌技術。
  • 確保拭子和運輸介質無菌且可供使用。
  1. 擦拭:
  • 將拭子輕輕擦拭可疑區域(例如細胞培養、咽喉、泌尿生殖區域)以收集樣本。
  • 立即將拭子放入運送介質中以保存樣本。

2.DNA提取:

  1. 裂解:
  • 將拭子轉移至含有 DNA 萃取試劑盒中裂解緩衝液的試管中。
  • 按照試劑盒說明孵育以裂解細胞並釋放 DNA。
  1. 純化:
  • 依照 DNA 萃取試劑盒方案純化 DNA。這通常涉及將 DNA 結合到柱上、洗掉污染物並洗脫純化的 DNA。

3. PCR(聚合酶鍊式反應):

  1. 準備 PCR 混合物:
  • 準備包含以下成分的預混液:
    • DNA 模板(來自萃取步驟)
    • 支原體特異性引子
    • dNTP
    • Taq聚合酶
    • 緩衝液
  1. 放大:
  • 使用適當的循環條件設定 PCR 機器(通常是初始變性,然後是變性、退火和延伸循環)。
  1. 檢測:
  • 對於終點 PCR,在瓊脂糖凝膠上運行擴增產物,並用 DNA 結合染料(例如溴化乙錠)染色,以在紫外光下可視化條帶。
  • 對於即時 PCR,使用螢光染料或探針即時監測擴增。

結果解釋:

  • 正面結果:
  • 凝膠電泳中出現特異性條帶或即時 PCR 中出現陽性訊號表示支原體 DNA 的存在。
  • 負面結果:
  • 缺乏特定條帶或無擴增訊號表示不存在支原體 DNA。

其他注意事項:

  • 控制:
  • 在 PCR 中加入陽性和陰性對照以驗證結果。
  • 污染預防:
  • 使用單獨的區域進行樣本製備、PCR 設定和分析,以避免污染。
  • 定期使用 DNA 降解劑清潔工作表面和設備。

此過程可確保準確檢測樣品中的支原體。對於臨床應用,請務必遵循相關衛生當局和機構建議的指南和方案。

上一篇: 下一個:

相關建議

展開更多!