如何用拭子檢測支原體

使用拭子檢測支原體通常涉及幾個步驟，包括樣本採集、DNA 萃取和分子測試。以下是過程的概要：

所需材料：

• 無菌拭子
• 運輸介質（例如，PBS 或特定支原體運輸介質）
• DNA萃取試劑盒
• PCR試劑及設備
• 支原體檢測特異性引子
• 凝膠電泳儀或即時螢光定量PCR儀

逐步程序：

1. 樣本採集：

1. 準備工作：

• 戴上無菌手套並使用無菌技術。
• 確保拭子和運輸介質無菌且可供使用。

1. 擦拭：

• 將拭子輕輕擦拭可疑區域（例如細胞培養、咽喉、泌尿生殖區域）以收集樣本。
• 立即將拭子放入運送介質中以保存樣本。

2.DNA提取：

1. 裂解：

• 將拭子轉移至含有 DNA 萃取試劑盒中裂解緩衝液的試管中。
• 按照試劑盒說明孵育以裂解細胞並釋放 DNA。

1. 純化：

• 依照 DNA 萃取試劑盒方案純化 DNA。這通常涉及將 DNA 結合到柱上、洗掉污染物並洗脫純化的 DNA。

3. PCR（聚合酶鍊式反應）：

1. 準備 PCR 混合物：

• 準備包含以下成分的預混液：
  • DNA 模板（來自萃取步驟）
  • 支原體特異性引子
  • dNTP
  • Taq聚合酶
  • 緩衝液

1. 放大：

• 使用適當的循環條件設定 PCR 機器（通常是初始變性，然後是變性、退火和延伸循環）。

1. 檢測：

• 對於終點 PCR，在瓊脂糖凝膠上運行擴增產物，並用 DNA 結合染料（例如溴化乙錠）染色，以在紫外光下可視化條帶。
• 對於即時 PCR，使用螢光染料或探針即時監測擴增。

結果解釋：

• 正面結果：
• 凝膠電泳中出現特異性條帶或即時 PCR 中出現陽性訊號表示支原體 DNA 的存在。
• 負面結果：
• 缺乏特定條帶或無擴增訊號表示不存在支原體 DNA。

其他注意事項：

• 控制：
• 在 PCR 中加入陽性和陰性對照以驗證結果。
• 污染預防：
• 使用單獨的區域進行樣本製備、PCR 設定和分析，以避免污染。
• 定期使用 DNA 降解劑清潔工作表面和設備。

此過程可確保準確檢測樣品中的支原體。對於臨床應用，請務必遵循相關衛生當局和機構建議的指南和方案。