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核酸萃取工藝

核酸萃取是分子生物學和診斷測試的基本步驟,使研究人員和醫療保健專業人員能夠從各種生物樣本中分離 DNA 或 RNA,以進行下游分析。以下是核酸萃取過程的概述:

樣品採集:此過程從收集含有目標核酸的生物樣本開始。樣本可以包括血液、組織、唾液、拭子、尿液或其他體液,取決於特定應用。

樣品裂解:裂解收集的樣本以破壞細胞並釋放核酸。含有去污劑、離液劑或酵素的裂解緩衝液通常用於破壞細胞膜並降解蛋白質,從而接近核酸。

核酸結合: 一旦核酸釋放到裂解液中,它們需要選擇性地結合到固相基質,例如二氧化矽膜或磁珠。結合基質的選擇取決於樣品類型、核酸類型(DNA 或 RNA)和下游應用等因素。

洗滌:結合後,清洗固相基質以去除污染物,例如蛋白質、脂質和其他細胞碎片。洗滌步驟有助於純化核酸並減少後續分析中的背景雜訊。

洗脫:然後使用低鹽緩衝液或水從固相基質中洗脫純化的核酸。洗脫將核酸釋放到乾淨的溶液中,為下游應用做好準備,例如 PCR(聚合酶鍊式反應)、定序或其他分子測定。

品質監控:萃取的核酸可能需要經過品質控制步驟來評估其濃度、純度和完整性。常見的定量方法包括紫外光譜法(例如,使用分光光度計)或螢光測定法(例如,使用基於螢光的測定)。純度通常透過測量特定波長下的吸光度比來評估(例如,DNA 的 A260/A280 比或 RNA 的 A260/A230 比)。完整性可以透過凝膠電泳或毛細管電泳來評估。

儲存應用:純化的核酸可以儲存在適當的溫度(-20°C 或 -80°C)下進行短期或長期儲存,具體取決於預期用途和穩定性要求。

值得注意的是,核酸萃取方案可能會根據特定的樣本類型、所需的核酸類型、下游應用以及可用的設備或試劑盒而有所不同。研究人員和實驗室人員經常優化萃取方案,以實現萃取核酸的高產量、純度和完整性,從而實現可靠的下游分析。此外,自動化和基於試劑盒的方法在簡化和標準化萃取過程方面變得越來越普遍,特別是在高通量實驗室環境中。

流感病毒核酸萃取工藝

流感病毒的核酸萃取過程通常遵循與一般核酸萃取類似的工作流程,但對病毒和正在處理的樣本有一些特殊的考慮。以下是流感病毒核酸萃取過程的概述:

樣本採集:鼻咽拭子、鼻洗液、喉嚨拭子或呼吸道分泌物通常是從疑似流感感染者身上採集的。

樣本滅活:為了確保生物安全並防止病毒傳播,可以使用適當的病毒滅活緩衝液或熱處理來處理收集的樣品,以使病毒不具感染性,同時保留核酸用於萃取。

樣本裂解:滅活的樣本被裂解以釋放病毒RNA。含有去污劑、離液劑或酵素的裂解緩衝液用於破壞病毒包膜並釋放病毒核酸。

核酸結合:裂解後,病毒 RNA 透過通常涉及離液鹽和乙醇的過程選擇性地結合到固相基質,例如二氧化矽膜或磁珠。此步驟可純化和濃縮病毒 RNA。

清洗:清洗含有結合病毒RNA的固相基質,以去除污染物,例如蛋白質、細胞碎片和可能幹擾下游應用的抑制劑。

洗脫:使用低鹽緩衝液或水從固相基質洗脫純化的病毒RNA。洗脫將病毒 RNA 釋放到乾淨的溶液中,為下游分析做好準備,例如用於流感病毒檢測和表徵的逆轉錄聚合酶鏈反應 (RT-PCR)。

品質控制:萃取的病毒 RNA 可能會經過品質控制步驟,使用紫外光譜、螢光測定或 RT-PCR 等方法評估其濃度、純度和完整性。

儲存:純化的病毒RNA可以儲存在適當的溫度(-20°C或-80°C)下進行短期或長期儲存,具體取決於預期用途和穩定性要求。

需要注意的是,流感病毒的核酸萃取過程可能會因特定樣本類型、病毒量、所用檢測方法以及可用設備或試劑盒等因素而有所不同。此外,應嚴格遵守生物安全預防措施,以防止樣本處理過程中的病毒傳播。專為流感病毒檢測而設計的自動化萃取平台和商業萃取試劑盒通常用於簡化和標準化臨床和研究實驗室的萃取過程。

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