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聚合酶鍊式反應、常用 PCR 酶

PCR(聚合酶鍊式反應)是一種常用於體外擴增 DNA 分子的技術,PCR 酶是該反應的關鍵組成部分。 PCR酶的主要類型包括Taq聚合酶、Pfu聚合酶和Taq的熱啟動變體 DNA聚合酶.

Taq聚合酶

Taq 聚合酶是最早廣泛使用的 PCR 酶之一。 它是從一種名為水生棲熱菌的細菌中分離出來的,具有優異的耐熱性。 Taq 聚合酶在高溫下穩定,適用於 PCR 的變性、退火和延伸步驟。 然而,Taq聚合酶由於缺乏3'-5'外切核校正功能,因此在GC含量高的區域中錯誤率較高。

Pfu聚合酶

Pfu聚合酶是從嗜熱藍細菌中分離出來的,與Taq聚合酶相比,其耐熱性更優異。 具有3′-5′外核苷酸校正功能,因此在擴增GC含量高的區域時,錯誤率更低,生成更準確的擴增產物。

Taq DNA 聚合酶的熱啟動變體

由於Taq聚合酶需要在較高溫度下激活,因此PCR反應開始時可能會產生非特異性產物。 為了克服這個問題,引入了熱啟動 PCR 酶,包括在低溫下無活性、在高溫下可激活的變體。 這有助於減少PCR反應早期非特異性產物的形成,從而提高特異性。

由於Taq聚合酶需要在較高溫度下激活,因此在PCR反應開始時可能會產生非特異性產物。 為了克服這個問題,引入了熱啟動 PCR 酶,包括在低溫下無活性、在高溫下可激活的變體。 這有助於減少PCR反應早期非特異性產物的形成,從而提高特異性。

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